本作では原作ファンの人気が高いヴィラン（悪役）であるヴェノムが登場する。ヴェノムを生み出すシンビオートや、もうひとりのヴィランであるサンドマンの表現に技術力を結集させたため、製作費に映画史上最高額となる2億5800万ドル（約290億円）が投じられ、それまでの最高額であった『キング・コング』（2005年版）の2億ドル（約225億円）を遙かに上回ったことで話題となった。

DVDの音声解説では、当初予定されていたヴィランは「ヴァルチャー」で、ベン・キングズレーを起用する予定だったとのことである。またクライマックスのシークエンスにおいても「MJではなくグウェンが捕らわれるはずだった」「脚本が変更された結果、ハリーとスパイダーマンが協力して闘うようになった」という発言があり、製作段階でストーリーラインが大きく変更されたことがわかる。

本作に登場するヴィランは製作側の意向で公開直前まで極秘とされていたが、あるインタビューにおいてMJ役のキルスティン・ダンストが「ヴィランはサンドマンとヴェノム、それに半分（ニュー・ゴブリン）よ」と口を滑らせ、早い段階で発覚してしまうハプニングがあった。
公開・反響

アメリカでは北米の週末興行収入が1億5110万ドル（約161億円）となり、2006年に記録更新した『パイレーツ・オブ・カリビアン/デッドマンズ・チェスト』の1億3560万ドル（約144億円）を超えて歴代1位となった[16]。またアメリカ国内における2007年の年間興収ランキングでは3億3650万ドル（約379億円）という成績で、『シュレック3』の3億2100万ドル（約361億円）を押さえ1位にランクインした。
日本

2007年4月16日、ソニー・ピクチャーズ エンタテインメントでは史上初となる東京でのワールド・プレミアが催され、主要キャストとサム・ライミ監督、製作のローラ・ジスキン、アヴィ・アラド、グラント・カーティスが来日した。

本シリーズはとりわけ日本での人気が高いため、製作会社のソニー・ピクチャーズ・エンタテインメントは日本での興行を最重要視し、日本公開を当初予定していた2007年5月5日から世界最速となる同年5月1日に変更した[17]。公開初日からの観客動員数は約517万人と前2作を大きく凌ぎ、興行収入も71億円を記録した。日本国内における2007年の年間興収ランキング洋画部門では3位にランクインした[3]。
ソフト

2007年10月17日、ソニー・ピクチャーズ エンタテインメントよりリリースされた。